Напълно автоматична машина за извличане и откриване на нуклеинова киселина на New Tech

Пет сила:
● Инструмент, конфигуриран с етап на извличане на нуклеинова киселина и пречистване
● Инструмент, конфигуриран с модул за ултразвукова екстракция
● Инструментът е конфигуриран напълно автоматично
● Инструмент, конфигуриран с усилване на променлива температура
● Инструментът е конфигуриран с напълно затворен комплект реагенти

1. Трябва ли реагентите за откриване на нуклеинова киселина да бъдат извлечени и пречистени?
Принципът на откриване на нуклеинова киселина е следният: под действието на праймера, ДНК полимеразата се използва за извършване на амплификация на верижна реакция върху матрична ДНК/РНК (изискваща обратна транскрипция на NA) и след това количеството освободен флуоресцентен сигнал се открива, за да се определи дали пробата съдържа нуклеиновата киселина (ДНК/РНК) на патогена, който трябва да бъде открит.

1) Пробите, които не са били екстрахирани или пречистени, може да съдържат много компоненти, които влияят на крайния резултат: нуклеаза (която може да разтвори целевата нуклеинова киселина и да причини фалшиво отрицателен резултат), протеаза (която може да намали ДНК полимеразата и да причини фалшиво отрицателен резултат), тежки метали сол (което води до инактивиране на синтазата и причинява фалшиви положителни резултати), твърде киселинно или твърде алкално PH (което може да причини неуспех на реакцията), Непълна РНК (водеща до фалшиво отрицателна недостатъчност на обратната транскрипция).

2) Някои проби са трудни за директно амплифициране: Грам-положителни и някои паразити, поради дебелите им клетъчни стени и други структури, ако не преминат през процеса на екстракция и пречистване на нуклеинова киселина, комплектът без екстракция може да се провали за такива мостри.

Поради това се препоръчва да изберете комплект за тестване или инструмент, конфигуриран със стъпката на екстракция на нуклеинова киселина.

2. Химическа екстракция или физическа ултразвукова фрагментационна екстракция?
Най-общо казано, химическата екстракция може да се приложи към по-голямата част от предварителната обработка и пречистването.Въпреки това, при дебелостенни Грам-положителни бактерии и някои паразити, също е така, че химическата екстракция не може да получи ефективни матрици на нуклеинова киселина, което води до фалшиво отрицателно откриване.В допълнение, химическата екстракция често използва силни агенти, ако елуирането не е цялостно, лесно е да се въведе силна основа в реакционната система, което води до неточни резултати.

Ултразвуковата фрагментация използва физическо раздробяване, което е успешно използвано от GeneXpert, водещо предприятие в областта на POCT за човешка употреба, и има абсолютно предимство при извличането на нуклеинова киселина от някои сложни проби (като Mycobacterium tuberculosis).

Поради това се препоръчва да изберете комплект за тестване или инструмент, конфигуриран със стъпка на екстракция на нуклеинова киселина.и е оптимално, ако има модул за ултразвукова екстракция.

3. Ръчно, полуавтоматично и напълно автоматично?
Това е проблем с цената на труда и ефективността на работа.В момента болниците за домашни любимци нямат достатъчно персонал, а извличането и откриването на нуклеинова киселина е работа, която изисква определени умения и опит.Няма съмнение, че напълно автоматичната машина за извличане и откриване на нуклеинова киселина е идеалният избор.

4. Постоянно температурно усилване или променливо температурно усилване?
Реакцията на амплификация е връзка за откриване на нуклеинова киселина и професионалната технология, включена в тази връзка, е сложна.Грубо казано, ензимите се използват за усилване на нуклеиновата киселина.В процеса на усилване се открива усиленият флуоресцентен сигнал или вграденият флуоресцентен сигнал.Най-общо казано, колкото по-рано се появи флуоресцентният сигнал, толкова по-голямо е съдържанието на целевия ген в пробата.

Амплификацията при постоянна температура е амплификация на нуклеинови киселини при фиксирана температура, докато амплификацията при променлива температура е циклична амплификация стриктно в съответствие с денатурация-отгряване-удължаване.Времето за усилване на постоянната температура е извършено, докато времето за усилване на променливата температура е силно повлияно от скоростта на повишаване и спадане на температурата на инструмента (понастоящем много производители са успели да направят 40 цикъла на усилване за около 30 минути).

Ако лабораторните условия са добри и зонирането е строго, разумно е да се каже, че разликата в точността между двете няма да е голяма.Въпреки това, амплификацията с променлива температура ще синтезира повече продукти на нуклеинова киселина за относително по-кратко време.За лаборатории без строго зониране и професионално обучение на персонал, рискът от изтичане на аерозол на нуклеинова киселина ще бъде по-голям, фалшивият положителен резултат се появява, след като се случи изтичане и е изключително трудно да се елиминира.

В допълнение, амплификацията при постоянна температура също е по-склонна към неспецифична амплификация, когато пробата е сложна (относителната реакционна температура е по-ниска и колкото по-висока е температурата на удължаване, толкова по-добра е специфичността на свързване на праймера).

Що се отнася до настоящата технология, усилването с променлива температура е по-надеждно.

5. Как да избегнем риска от изтичане на продукти за амплификация на нуклеинова киселина?
Понастоящем много производители избират PCR тръба от тип жлеза като тръба за реакция на нуклеинова киселина, която е запечатана чрез триене, а денатурацията на температурата при денатурацията с променлива температура при PCR амплификацията с променлива температура достига 90 градуса
Целзий .Повтарящият се процес на разширяване с топлина и свиване със студ е голямо предизвикателство за запечатването на PCR тръбата, а PCR тръбата от тип жлеза е сравнително лесно да причини изтичане.

За предпочитане е реакцията да се приеме с напълно запечатан комплект/епруветка, за да се избегне изтичането на реакционния продукт.Би било перфектно, ако може да се разработи напълно запечатан комплект за извличане и откриване на нуклеинова киселина.

Така че новата напълно автоматична машина за извличане и откриване на нуклеинови киселини на New Tech има горните пет оптимални избора.